一文與您分享基因擴(kuò)增儀的正確使用方法
更新時(shí)間：2023-05-09 點(diǎn)擊次數(shù)：2756次
基因擴(kuò)增儀被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)領(lǐng)域，它可以把DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增，讓科學(xué)家更方便地從樣本中提取出特定的DNA片段。本文將為你介紹
基因擴(kuò)增儀的使用方法，幫助你更好地掌握這一實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
1.準(zhǔn)備工作
在使用之前，需要先準(zhǔn)備好耗材和實(shí)驗(yàn)器材。首先，檢查PCR試劑盒是否完好無(wú)損、是否過(guò)期。其次，檢查隨機(jī)引物（primers）是否正確、完整。同樣重要的是，準(zhǔn)備好自己需要擴(kuò)增的DNA模板，保證模板的質(zhì)量和純度。
2.裝載PCR反應(yīng)體系
裁切好所需長(zhǎng)度的特定引物后，需要將引物與PCR試劑盒配制成反應(yīng)液。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的指導(dǎo)，在離心管中混合PCR混合液。通常情況下，一支PCR反應(yīng)混合液可擴(kuò)增20ulPCR反應(yīng)液。
3.安裝PCR管到該儀器
將裝有PCR反應(yīng)體系的管放入孔位。根據(jù)PCR引物的交聯(lián)溫度，設(shè)置好反應(yīng)程序的溫度體系。設(shè)定好反應(yīng)程序后，按照儀器的說(shuō)明書(shū)啟動(dòng)擴(kuò)增程序。
4.擴(kuò)增反應(yīng)
通過(guò)基因擴(kuò)增儀可控制反應(yīng)的時(shí)間和溫度，通常PCR反應(yīng)具有3個(gè)階段：變性、退火和延伸階段。
?。?）變性：將DNA兩股分離為單股。
?。?）退火：引物結(jié)合到模板上并結(jié)束。
?。?）延伸：在DNA聚合酶作用下延長(zhǎng)引物序列并產(chǎn)生新的DNA片段。
通常情況下，反應(yīng)溫度體系如下所示：
1）變性：95℃，30秒。
2）退火：恰當(dāng)引物Tm-5℃~10℃。
3）延伸：72℃，30秒/每kbp。
4）重復(fù)擴(kuò)增若干次，一般為20-30次。
5.離心與收集產(chǎn)物
反應(yīng)液往往是渾濁的，需要離心以便去除沉淀。我們可以用凝膠電泳等方法檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，并對(duì)針對(duì)性更強(qiáng)的目的進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。
以上就是使用基因擴(kuò)增儀的步驟，希望這些內(nèi)容能幫助您更好地完成實(shí)驗(yàn)任務(wù)。當(dāng)然，在實(shí)踐過(guò)程中還可能會(huì)遇到各種問(wèn)題，需要耐心解決。
